همه چیز درباره ترمال سایکلر PCR|خرید و فروش ترمال سایکلر

ترمال سایکلر PCR
آخرین ویرایش: 1394.4.29/ ساعت 13.30 

تجهیزات آزمایشگاهی_ تجهیزات بیوتکنولوژی_ ترمال سایکلر Thermal Cycler PCR

فروشگاه تجهیزات آزمایشگاهی_ ترمال سایکلر
 

     ترمال سایکلر (Thermal cycler)، که با نام‌های دیگری چون ترموسایکلر، ماشین PCR، و یا تکثیر کننده DNA شناخته می‌شود، ابزاری آزمایشگاهی است که عموما برای تکثیر قطعات DNA استفاده می‌شود و این کار را به کمک واکنش زنجیره‌ای پلی مراز (PCR)  انجام می‌دهد. تکثیر قطعات DNA در کلون سازی، درمان بیماریهای ژنتیکی، تعیین هویت و حتی موارد پزشکی قانونی و موارد جنایی کاربرد دارد. ترمال سایکلرها، همچنین برای تسهیل دیگر واکنش‌های حساس به دما مانند هضم انزیم‌های محدود کننده استفاده می‌شود. این دستگاه دارای قطعه گرمایی با سوراخ‌هایی است که لوله‌های دارای مخلوط مورد نظر را درون خود جای می‌دهد. در مرحله بعد، چرخاننده، دمای این قطعه را طبق برنامه از پیش تعیین شده‌ای بالا و پایین می‌برد. در این مقاله تلاش شده است، تاریخچه دستگاه ترمال سایکلر، اجزای سازنده، نحوه عملکرد و کاربردها و انواع دستگاه‌های ارائه شده در شرکت ویتا طب کوشا ارائه گردد.
 
محتوای مطالب
1. تاریخچه دستگاه ترمال سایکلر PCR
2. انواع ترمال سایکلر PCR
3. مواد لازم برای کار با دستگاه ترمال سایکلر
4. نحوه عملکرد دستگاه ترمال سایکلر PCR
5. کاربردهای ترمال سایکلر
6. مشکلات کار با دستگاه ترمال سایکلر
7. انواع ترمال سایکلرهای ارائه شده در شرکت ویتا طب کوشا

1. تاریخچه ترمال سایکلر پی سی آر

     اولین ترمال سایکلرها برای استفاده با قطعه klenow (یکی از بزرگ‌ترین پروتئین‌هایی که با فعالیت DNA پلیمراز I در باکتری ای کلای ایجاد می‌شود) از زنجیره DNA پلیمراز I، طراحی شدند. از آنجایی که این آنزیم در طی هر مرحله گرما دادن در فرایندهای تکثیری تخریب می‌شد، مجبور به اضافه کردن آنزیم‌های جدید در هر چرخه و مرحله بودند. در نتیجه، با پیشرفت علم، واکنش‌های PCR، از آنزیم‌های DNA پلیمرازی استفاده کردند که از باکتری Thermus aquaticus به دست امده بود و به میزان زیادی در مقابل گرما مقاوم بود و به این ترتیب، به میزان زیادی طراحی ترمال سایکلرها را ساده ساخت.
     در حالی که در تعدادی از ماشین‌های قدیمی، بلوک مربوط به تولید و کنترل گرما در حمام روغن غوطه ور می‌شد تا دما را کنترل کند، در ماشین‌های پیشرفته PCR، عنصر Peltier مورد استفاده قرار گرفت. ترمال سایکلرها اغلب دارای بلوک‌هایی از جنس نقره‌ هستند که برای ایجاد تغییرات سریع دمایی و یکنواخت سازی دما در تمام بخش‌های بلوک استفاده می‌شوند. دیگر سایکلرها، دارای بلوک‌های چندگانه‌ای هستند که دارای ظرفیت دمایی بالایی بوده و دما را در شرایط ثابت و یکسان نگاه می‌دارد. در نهایت امروزه، ترمال سایکلرهایی طراحی شدند که دارای سیستم اپتیکی بوده و می‌توانستند از نور فلورسنت برای مانیتورینگ واکنش‌ها استفاده کنند.
ترمال سایکلر pcr

2. انواع ترمال سایکلر پی سی ار

1- در تشخیص بیماریها و کلونینگ DNA بکار می رود.
2- یک روش آزمایشگاهی برای سنتز مولکولهای DNAی بزرگ است.
3- برای انگشت نگاری DNA از طریق تکثیر مناطق بین سکانسهای تکراری بکار می رود.
4- به منظور شناسایی، استخراج یا تکثیر RNA از نمونه های سلول یا بافت ، مورد استفاده قرار می گیرد.

3. مواد لازم برای انجام  ترمال سایکلرپی سی آر

1- بافر PCR: شرایط یونی PH مناسب را برای واکنش PCR فراهم می کند
2- دزوکسی نوکلئوتید تری فسفات که به صورت مخلوطی از چهار باز A-T-C-G در بازار وجوددارد تا کنار هم چیده شوند و رشته مکمل را ایجاد کنند .
3- آغازگرها primer: پرایمرها قطعات سنتز شده ای از بازهای آلی اند که بر اساس قطعه ای مورد نظر الگوهای هدف ساخته می شوند.
4- ( tag DNA polymeras) یک انزیم مقاوم به دما است که همانند سازی DNA را انجام می دهد.
5- آب برای نهایی کردن   H2O2که باید کل ان حجم ۵۰ml یا ۲۵ml باشد .
6- کلرید منیزیم((mgcl2  نقش کوفاکتوری در فعالیت آنزیم tag دارد.

وسایل مورد نیاز برای انجام  ترمال سایکلرپی سی آر
     حداقل وسایل مورد نیاز برای انجام واکنش PCR، دستگاه ترموسایکلر (ایجاد کننده چرخه های دمایی)، میکرو پیپت، ظرف یخ و وسایل یکبار مصرفی مانند تیپ (جزء پلاستیکی که برای کشیدن محلول به میکرو پیپت متصل می شود) و ویال (لوله های درب دار کوچک، در دو اندازه بر اساس گنجایش آنها یعنی 200 و 500 میکرو لیتر)، که واکنش PCR در آنها انجام می شود) و ظروف نگهداری کننده آنها می باشد. لوله های واکنش، لوله های کوچک ۵% میلی لیتر، سمپلر یا میکرو پیپت و سر سمپلرهای یکبار مصرف مخصوص آنها که برای برداشتن مقادیر بسیار کم استفاده می گردد، دستگاه چرخش حرارتی و میکرو فیوژ.

4. نحوه عملکرد دستگاه ترمال سایکلر PCR

سه روش ساده بنای عملکردی واکنشهای PCR را در دستگاههای ترمال سایکلر ایجاد می کند و عبارتند از:
  • مرحله اول: واسرشت سازی (Denaturation)، 30 تا 60 ثانیه ، عمل انجام شده در این مرحله: جدا شدن دو رشته DNA
  • مرحله دوم: اتصال (Annealing)، 30 تا 60 ثانیه ، عمل انجام شده در این مرحله: اتصال پرایمرها به نواحی مکمل روی DNA و تعیین محدوده تکثیر قطعه DNA
  • مرحله سوم: گسترش (Extension یا Elongation)، به ازای هر 1000 نوکلئوتید طول قطعه 60 ثانیه ، عمل انجام شده در این مرحله: تکثیر قطعه DNA مورد نظر، این 3 مرحله بین 25 تا 40 بار تکرار می شود که به آن چرخه های PCR می گویند.
نحوه واکنش پلیمرازی pcr

5. كاربردهای مهم پی سی آر

1- تهيـه نسخه‌های متعدد از يک ژن مورد نظـر
2-  بررسی حضور يا عدم حضور يک ژن
3- تشخيص بيماری‌های قبل از تولد
4-تشخيـص عامل يک بيماری ناشناخته
5-تعيين جنسيت جنين
6-تشخیص سریع عوامل بیماریزا

6. مشکل کار با دستگاه پی سی ار

     اشكال PCR ، آلودگي نمونه‌هاي مورد بررسي توسط قطعات DNA خارجي است. اگر قبلا در داخل دستگاهي PCR يك نمونه انجام گرفته باشد، و ذره كوچكي از آن در داخل دستگاه باقي بماند در PCR نمونه بعدي مشكل ايجاد خواهد كرد. براي رفع مشكل، امروزه از ظروف يك بار مصرف استفاده مي‌شود. كليه ظروف قبل از استفاده اتوكلاو مي‌شوند تا سلول‌ها و مولكول هاي موجود در آن ها، تا حد ممكن غير فعال مي‌شوند. يـكــي از روش‌هــاي پـيـشـنهـادي،  انجـام PCR داخـلــي يـا Nested PCR اسـت. از ايـن روش بـا استفـاده از دو پرايمر قطعه‌اي از DNA را تكثير مــي‌دهـنــد و سـپــس قـطـعــه‌اي ديـگــر در داخـل DNAهــاي تـكـثـيــر شــده PCR مــي‌شــود. بــديــن صورت احتمال آلودگي كاهش مي‌يابد.

7. انواع مدلهای ترمال سایکلر PCR ارائه شده در شرکت ویتا طب کوشا

شما میتوانید با ورود به بخش فروشگاهی تجهیزات بیوتکنولوژی، انواع ترمال سایکلرها را بیابید. لیست تعدادی از پرفروش ترین آنها در اینجا آورده شده است. 

توسط : admin | تاریخ : 1395/03/10 | نظرات